zabel wolfgang vendredi 22 mars 2002 21:37

J'ai lu plusieurs textes normatifs pour l'assurance qualite d'un labo de bacterio notamment la norme ISO/TS 111 33-1 "Guide pour la preparation et la production des milieux de culture".Je me pose une question : est il obligatoire de pratiquer des tests de fertilite sur les milieux de culture prepares en labo (base deshydratee) sachant que :
-le labo ne veut pas decrocher une certification (cf le programme 59 et autres)
-le labo analyse des denrees  prevues pour la consommation animale ou humaine (additif).Le cas echeant existe t il un texte officiel obligeant l'entreprise à realiser ces tests si oui lesquels.

DVERDY  lundi 25 mars 2002 09:03

Il n'existe pas à ma connaissance de texte qui oblige un laboratoire à réaliser des tests de fertilité sur les milieux de culture qu'il prépare.

La norme ISO / TR 11133-1 que vous évoquez était un projet de norme datant d'octobre 1999. Je ne suis pas sûr que cette norme soit maintenant officielle. Si c'est le cas, je vous remercie de me le confirmer. Un autre projet est paru en avril 2001. c'est le 2ème volet de cette norme, CEN TC
275 qui est un guide pratique pour les tests de performance sur les milieux de culture.

Ces tests n'ont pas de caractère obligatoire, cependant, ils permettent de donner confiance dans la qualité des milieux de culture qui sont mis en oeuvre dans le cadre d'analyses microbiologiques. Il faut donc constituer une culture de référence pure (en vente à la Collection de l'Institut Pasteur).

En inoculant le milieu de culture, on vérifie qu'une souche pure pousse correctement. L'interprétation peut être qualitative (appréciation d'un trouble) ou quantitative (dénombrement sur gélose ).
Ces tests sont par contre exigés dans le cadre de l'accréditation d'un laboratoire selon le programme 59 du cofrac ou par CLAS (GB).

David VERDY
Responsable Assurance Qualité.

Jean CABY S.A

magali  mercredi 4 septembre 2002 12:03

Je me représente, Magali Cabus, responsable qualité d'un laboratoire d'analyses environnementales, pour lequel j'ai été audité en juin par le COFRAC.
Suites aux non-conformités et remarques qui ont été faites pendant l'audit, j'ai du mettre en place diverses actions correctives, dont une concernant la rédaction d'un mode opératoire concernant la préparation des milieux de culture.
Pour ce faire, je me suis basée sur la norme NF T 90-461 du juillet 2001, mais celle-ci ne concerne que les eaux.
En ce qui concerne les aliments, j'ai commandé à l'AFNOR la norme ISO/TS 11133-1 de 01-06-2000 intitulée : microbiologie des Aliments - Guide pour la préparation et la production des milieux de culture.
J'ai bien obtenue la Partie 1, mais je n'ai pas la partie 2 : Mise en pratique de l'assurance qualité des milieux de culture en laboratoire.
Cette partie me manque beaucoup dans mon travail et je ne sait pas comment la trouver.
Si quelqu'un peut m'indiquer : si elle existe bien et comment me la procurer (sous quel nom...) je le remercie d'avance.

Philippe TAILLIEZ  lundi 9 septembre 2002 16:01

Concernant la norme de préparation des milieux vous pouvez vous connecter à l'adresse suivante :

http://www.iso.ch/iso/fr/stdsdevelopment/techprog/workprog/TechnicalProgrammeProjectDetailPage.TechnicalProgrammeProjectDetail?csnumber=34501&switchLang=true

pierrebastres jeudi 31 juillet 2003 11:31

Je suis responsable qualité d'une PME du Sud Ouest, et je cherche un document que je puisse retravailler sur  informatique reprenant:

la composition des  milieux  de culture standard servant aux analyses bactérios de produits alimentaires
la description des méthodes standard employées

Philippe Sommer jeudi 31 juillet 2003 15:45

Concernant les milieux de culture, il faut s'adresser aux fabricants, chacun a sa propre instruction,
concernant les methodes d'analyses, vous trouverez sur le site de l'AFNOR les protocoles des méthodes d'analyses (moyennent evidemment paiement).

Ch LE DENTU vendredi 1 août 2003 11:07

Bonjour!! concernant infos sur milieux de culture, consultez le site <A HREF="www.sydiale.com">

Stephanie Rey: Thursday, October 14, 2004 6:08 AM

avez-vous deja teste des milieux de culture espagnols et pensez-vous qu ils soient vraiment de moins bonne qualite que les francais ou allemands?

labo.ecotecnic jeudi 14 octobre 2004 09:48

Travaillant, aussi bien avec des milieux D'origine Française qu'Espagnol (vu notre situation géographique), je n'ai pas pour l'instant constaté de diffèrences. Lors d'un essai AGLAE de 2003 nous avons testé les milieux fournis par AGLAE et ceux de notre Labo d'une marque Espagnol et aucune diffèrence ne fut constatée.
En Espagne beaucoup de fournisseurs produisent des milieux irradiés et "sous vide" avec une DLC de 4 voir 6 mois à un prix souvent inférieur au prix des fabriquants Français... Le problème je crois viendrait plutôt de ces DLC, car nous constatons souvent des contaminations bien avant la 1/2 DLC.

Fabrice jeudi 14 octobre 2004 22:51

Le rapport contamination/DLC ne devrait pas preter a discussion. Une diminution de la DLC par rapport a celle annoncee peut tres bien etre due a un mauvais stockage et/ou une mauvaise manipulation. La contamination citee ici provient certainement d'une contamination posterieure a la fabrication du milieu de culture... plusieurs theses pourrait etre emises en fait.

Pour revenir a la question initiale, je vous conseille tout simplement d'essayer le produit, mais surtout, le plus important est de realiser des tests de fertilites parallelement aux tests de sterilites!!! Vous connaitrez ainsi dans le temps la qualite de vos milieux.

En esperant avoir repondu a votre question, salutation!

labo.ecotecnic vendredi 15 octobre 2004 13:44

Je suis d'accord avec vous mais dans notre cas le stockage et correctement contrôlé au sein de notre labo, et en se qui concerne les contaminations postérieurs, elles me semblent impossible sur des plaques emballées individuellement et scellé par une feuille d'aluminium.Les colonies apparaissent emballage non corrompu...et sans manipulations directe de la plaque.

Stephanie Rey mercredi 20 octobre 2004 04:37

Je vous remercie pour ces informations et vais tester les 2 milieux.

rim fassi Tue, 11 Jan 2005 15:22:28 +0100 (CET)

étudiante à l'ENTIAA de Nantes, je suis à la recherche de la composition du milieu de culture des bactéries lactiques APT.
est ce que quelqu'un le reconnait sous une autre appelation?car je le trouve pas dans les manuels des milieux de culture.

scalime fabienne Tue, 11 Jan 2005 16:05:29 +0100 (CET)

Bouillon APT
peptone de caseine : 12.5g
Extrait de levure : 7.5g
glucose : 10g
Chlorure de sodium : 5g
Citrate trisodique : 5g
phosphate dipotassique : 5g
Tween 80 (polysorbate 80) : 0.2g
Sulfate de magnesium : 0.8g
sulfate ferreux : 40mg
thiamine chlorydrate 1mg

pH : 6.7
autoclaver 20 minutes à 110°C

Source : microbiologie alimentaire Dunod (ma bible depuis mes etudes et qui me sert regulierement pour mon travail)

Jean-Yves François Wed, 2 Mar 2005 20:54:02 +0100

Le 02-mars-05, à 18:10, mr..mp a écrit :

> Je souhaiterai mettre en place un contrôle fertilité et sélectivité 
> des poudres désydratées avant utilisation (pour préparation de milieux 
> de cultures), mais il existe une multitude de souches ATCC 
> correspondant à un même germe( une souche= différents numéro ATCC); 
> Comment savoir quelle souche privilégier àpar rapport à une autre?
>


pour ce faire, je ne peux que vous conseiller de vous référer aux normes de la série ISO 11.133. Très complètes, elles présentent, pour chaque milieu de culture utilisé en microbiologie des denrées alimentaires, les souches de référence (ATCC, ...) à utiliser afin de déterminer les caractéristiques (sélectivité, productivité, ...) des milieux de cultures utilisés.

Catherine PICARD Mon, 7 Mar 2005 11:03:53 +0100

Et pour le contrôle qualité des milieux de culture utilisés pour les eaux : NF T90-461 Juillet 2001



ELIE-DIT-COSAQUE Nadine Fri, 18 Mar 2005 12:33:44 -0400

Je suis ingénieur au laboratoire départemental d’analyses de la Martinique (analyses des eaux, aliments et santé animale). J’apprécie ce type de forum de discussion, afin de réduire les distances et améliorer les échanges entre professionnels.

Nous avons mis en place un système d’évaluation de nos milieux de culture et réactifs. Les nouvelles normes pour les essais de performance des milieux de culture (XP CEN ISO/TS 11133-2 de janvier 2004 + NF T 90-461 de 2001) sont très pointues en matière de protocoles d’évaluation quantitative (détermination de la productivité).

Notre laboratoire utilise pour ces évaluations, des souches de référence provenant du laboratoire BIOREFERENCE de l'Institut Pasteur de Lille. Nous avons choisi ces pastilles pour la simplicité d'utilisation : ce sont des pastilles déshydratées. Seulement, nous avons un problème de survie de nos souches. Par exemple, lorsqu' est annoncé sur le certificat de validation, une quantité moyenne par pastilles de 1093 colonies, on peut s'attendre pour certains germes à 2-3 colonies et même rien! Alors que tout a été fait dans les conditions, et qu'une souche de travail donnera pour le même milieu un résultat correct.

En moyenne, il faut compter 3 jours entre l’expédition et la réception du colis au laboratoire. Bien que cet envoi est effectué dans un emballage avec freeze pack, la température à l’intérieur du colis est aux environs des 10-15°C à l’arrivée.

Nous pensons donc que les souches ne supportent pas le transport. Au laboratoire, nous avons tenté de revivifier nos souches : en les incubant dans un bouillon nutritif tel que Bouillon cœur- cervelle ou Eau peptonée tamponnée durant quelques heures ou quelques jours. A priori, la plupart des souches a pu être récupérée ; seulement nous perdons totalement la notion de quantité moyenne par pastille !

Vers quels types de souches ou de méthodes serait-il plus judicieux de se tourner pour pouvoir travailler en quantitatif?

ELIE- DIT- COSAQUE Nadine
Ingénieur chargé de missions
Laboratoire Départemental d'analyses (LDA972)
Conseil Général de la Martinique
Tel : 05 96 71 34 52 (poste 375)
Fax : 05 96 70 61 23
@ : ElieN@cg972.fr

Jean-Marc Hanna Mon, 21 Mar 2005 08:53:02 +0100

Pouvez-vous tenter d'utiliser des formes sporulées plus adaptées au transport
sur longue distance (atrophéus, stearothermophilus...). En fonction de vos milieu de culture, vous trouverez des indicateurs biologiques adaptés auprès de différents fournisseurs de version sur pastille (polypro, inox...).
Ces indicateurs tiennent parfaitement le transport. Nous en exploitons des versions provenant des USA
et qui supportent parfaitement ce supplice avec une énumération convaincante.

Jean-Marc Hanna Mon, 21 Mar 2005 16:34:02 +0100

Les fournisseurs connus sont situés aux USA ou distribué en France
APEX laboratories (Pas de distributeurs - voir aux USA)
SGM Biotech (distribué par amilabo en France)

Nous n'utilisons que les deux premiers. D'autres existent et fournissent ce type de matériel pour la validation de cycles des isolateurs du secteur pharmaceutique.

samyzame Sunday, June 05, 2005 5:33 PM

Je voudrais savoir quel type de milieux utiliser pour la recherche des coliformes (totaux et fécaux) ainsi que les streptocoques pour des boissons artificielles (eau+acide citrique+sucre+colorant)

Florence Humbert Mon, 6 Jun 2005 12:37:48 +0200

Je ne sais pas très bien les tenants et les aboutissants de votre question,  mais je vais vous donner les éléments de réponse dont je dispose. En principe, selon les normes AFNOR, et en l'absence de norme sectorielle particulière (=pour une catégorie de produits particuliers, ex : les viandes, les produits laitiers, ....) les coliformes totaux et fécaux doivent être recherchés sur milieu VRBL.

Selon une définition initiale et ancienne (Henri Leclerc s'inspirant d'une norme ISO de l'époque) : "Les organismes coliformes sont des bacilles Gram 
négatif, non sporulés, aéro ou anaérobies facultatifs, capables de se multiplier en présence de sels biliaires ou d'agents de surface ayant les mêmes propriétés et capable de fermenter le lactose avec production d'acide, de gaz et d'aldéhyde en 48 heures à une température comprise entre 35 et 37 
°C ; Les coliformes thermotholérants sont des coliformes qui ont les mêmes propriétés à 44°C."

La notion de coliforme est donc un CRITERE qui fait référence à un milieu bien défini, un temps et une température d'incubation (30° maintenant et 
44° ), une taille des colonies etc... cf les Normes AFNOR V08-050 (dénombrement des coliformes par comptage des colonies obtenues à 30°C - 
Méthode de routine) et V08-060 (dénombrement des coliformes thermotholérants par comptage des colonies obtenues à 44°C - Méthode de routine). En clair, vous obtiendrez l'ensemble des bactéries contenues dans votre échantillon de départ qui supportent les conditions de culture et de croissance qui sont 
décrits dans la norme.

Ce "concept" a été établi pour regrouper les Entérobactéries ayant certains caractères biochimiques et physiologiques communs et pouvant avoir une 
signification sanitaire en raison de leur origine fécale.

1er avertissement : les Aéromonas ne sont pas des coliformes mais ils donnent des colonies très semblables aux coliformes sur milieu VRBL.

2nd avertissement : toutes les Entérobactéries n'ont pas une origine fécale. Nombre d'entre elles ont une origine aquatique et/ou tellurique.Donc attention dans l'utilisation et les résultats de ces critères, en fonction des types d'échantillons analysés (eaux, aliments, origine de cet aliment (animale, végétale....) traitements subis, etc...)

Hugues Jourdan Mon, 6 Jun 2005 16:27:44 +0200 (CEST)

Filtration pour éliminer les produits posant des problèmes.

samyzame Mon, 06 Jun 2005 16:09:03 -0000

J'ai envoyé un message concernant des boissons artificielles .
En réalité le problème est valable pour tout type de boissons .

Nous avons pris l'habitude de rechercher les coliformes totaux et fécaux sur milieu BCPL (tube et flacon) alors que pour les streptocoques nous utilisons le ROTH (tube et flacon) .
Il semblerait que ces milieux ne sont valables que pour des produits solides . Par contre pour les liquides (boissons...), il serait préférable d'utiliser d'autres milieux plus sélectifs .
Merci pour plus d'information (quelle table utiliser pour l'interprétation de la lecture?)

Sandra PAPEAU  Sat, 30 Jul 2005 15:11:43 +0200 (CEST)

Je suis membre du forum hygiene depuis un certain temps déja mais je me presente ici en tant que responsable qualité en abattoir de volailles et responsable de laboratoire. 
A ce titre, je m'occupe de l'equipement du labo . Un appareil de filtration m'a été proposé: le spreadfilter qui servirait a la fois pour l'analyse
d'echantillons d'eau et d'aliments. Cet appareil nécessite que le diluant des echantillons contienne au moins 1% de tween 80. 
Ma question est la suivante: ai-je la possibilité, en preparant un bouillon de culture (dont la recette est bien determinée) d'y ajouter 1% de tween80 sans en affecter la qualité?

magloire LEGONOU Sat, 30 Jul 2005 19:06:04 +0200 (CEST)

J'ai lu votre préoccupation et ai pensé vous dire ce que je sais à ce sujet. 
En général, l'ajout de twen à la solution de dilution ne modifie pas en tant que tel la composition de cette solution. Dans la préparation de la
suspension mère de de certains échantillons,la norme le recommande

GIBOUT Olivier Mon, 1 Aug 2005 08:23:45 +0200

Si vous reprenez la norme ISO 6887 de préparation de la suspension-mère, l'ajout de Tween80 a raison de 1 à 10g/l est recommandé afin d'améliorer l'émulsification des produits gras dans l'EPT.
L'exemple donné est l'ajout de 4g/l d'EPT pour un produit à 40% de matière grasse.

kouisahon Mardi 28. Novembre 2006  0:31

J'suis Sylvie,une jeune pharmacienne.J'ai été affectée pour mon premier poste à l'unité de préparation et de production des milieux de culture dans le laboratoire de l'un des CHU de mon pays.
J'aimerais beaucoup échanger avec d'autres pharmacien(ne)s qui occupent déjà ce poste à travers le monde.Avant, il n'y avait pas de pharmacien à ce poste alors ma préoccupation essentielle demeure la qualité à tous les niveaux de fabrication,depuis l'utilisation de la verrerie réutilisable,de la qualité de l'eau ,des milieux de culture
deshydratés jusqu'à la fabrication du milieu.Aussi aimerais je avoir l'expérience de mes devanciers dans ce domaine. J'aimerais aussi savoir quelles sont les autres spécialisations que je peux ajouter à mon diplome de pharmacien pour être performante dans ce domaine, je veux pas être passive,j'aimerais être à la hauteur de ce premier poste.
Je compte vraiment sur votre bonne foi.
Merci à tous!!!

Dr ALAOUI L.C. Mardi 28. Novembre 2006  9:54

Bonjour Sylvie

au Maroc nous avons un projet de norme PNM qui reprend en intégralité une norme ISO : ISO/TS 11133-1: guide pour la préparation et la production des milieux de culture en laboratoire; partie 1: guide général pour l'assurance de la qualité pour la préparation des milieux de culture en laboratoire.
Cette norme détaille toutes les étapes de la réception, à la production et au stockage.
Donc si tu peux te la procurer, n'hesite pas elle est très interressante.

nadia8elamri Dimanche 13. Avril 2008 16:18

je cherche un milieu de culture pour ces dux bactéries lactobacillus rhamnosus et propionibactérium shermani

Halim CHALABI Dimanche 13. Avril 2008 18:03

le milieu de base pour la culture de lactobacillus rhamnosus est le milieu (bouillon) MRS (MAN ROGOSA ET SHARP)pour la composition voir à titre d'exemple la préparation par le labo OXOID France :

http://www.oxoid.com/fr/index.asp?mpage=iproductdetail&pre=CM0361&l=FR&x=

il y a d'autres labo qui peuvent fournir et le produit et les informations ex. GROSSERON FRANCE... ensuite il va falloir identifier le rhamnosus parmi les lactobacilles pour les differencier du L. brevis ou du L. plantarum ou du bifidus (celui du yaourt Danone Activia).

Pour le Propionibacterium freudenreichii ssp shermanii : Le milieu de référence, couramment utilisé dans l'industrie fromagère, est le YELA. (Yeast Extract Lactate Agar) décrit par Hettinga et al., 1968

A titre d'exemple pour avoir une idée :

Préparation d'un milieu de dénombrement contenant du glycérol.

A 1000 ml d'eau distillée, on ajoute :

10 g de tryptone commercialisée par la Société BIOKAR

10 g d'extrait de levure commercialisé par la Société BIOKAR

10 g de lactate de lithium commercialisé par la Société MERCK

0,25 g de PO 4 HK 2 ( hydrogénophosphate de potassium), 0,05 g de SO

4 Mn(sulfate de manganèse) commercialisés par la Société Merck et

0,05 g de pourpre de bromocrésol, commercialisé par la Société Sigma.

D'autres indicateurs colorés de variation de pH tels le bleu de bromothymol, le vert de bromocrésol ou le rouge de méthyle ou de phénol peuvent également être utilisés en lieu et place du pourpre de bromocrésol.

La solution obtenue est additionnée de 6 g de glycérol puis ajustée à pH 7,0 par addition de NaOH et gélosée par ajout de 15 g d'agar type E ( produit commercialisé par la Société Biokar) . Elle est portée à ébullition sous agitation pour dissoudre l'agar, est répartie en flacons et est stérilisée par autoclavage 20 minutes à 115°C.

Il y a d'autres méthodes il faut voir la société BIOKAR (France) qui fait ces produits.

J'espère vous avoir orienté car en fait il faudrait consulter un ouvrage de bactériologie laitière ou de bactério médicale (Institut Pasteur par ex.) pour avoir plus de précisions.

espoires_43Wednesday, August 06, 2008 3:29 PM

es que on peux conserver les milieux de culture prés à l'emploi à l'air ambiant.

batikh ines Jeudi 7. Août 2008 13:32

Normalement vous devez vous conformer à la notice du fabriquant du milieu prés à l'emploi en matière de température et délais de conservation.beaucoup de milieux sont conservés entre 15 et 20°C

Sent: Monday, February 16, 2009 2:04 PM

je voudrais savoir quel type d'eau on utilise en microbiologie :

distillée, bidistillée, osmosée, déminéralisée ??? J'ai besoin de ce renseignement pour installer un système de production d'eau dans mon labo, mais je ne sais que choisir... Merci pour vos conseils !

Pascal Rudeaux Lundi 16. Février 2009 19:07

On utilise une eau de qualité.

Cette qualité d'eau est obtenue selon les technologies ci dessous indiquées.

La tecnologie que vous utiliserez dépendra de la qualité initiale de votre eau.

Hubert BAZIN Lundi 16. Février 2009 19:29

je sais que je vais me prendre une volée de bois vert, mais je crois nécessaire de poser une question préalable : Si votre compétence ne s'étend pas jusqu'à la qualité de l'eau à utiliser, à quel titre vous occupez-vous de la création d'un laboratoire ?

Sinon, il vous faut de l'eau stérile, sans javel ni autres contaminants chimiques.

L'ASTM (American Society for Testing and Material : www.astm.org) recommande une eau de type 2, dont la résistivité est supérieure à 1megohm-cm http://www.chemistry.nmsu.edu/Instrumentation/ASTM_H20.html

On prend généralement de l'eau ... disponible : distillée ou osmosée. http://fr.wikipedia.org/wiki/Milieu_de_culture

Les résines échangeuses vont remplacer les ions Ca++ par des ions Na+, ce qui va fausser la composition de vos milieux de culture.

Ce sont souvent les autres applications du labo qui vont impacter sur le choix : les manips de chimie exigent souvent de l'eau ultra-pure; la PCR exige que l'eau ne contienne aucune trace d'ADN (de l'eau stérile peut en contenir), etc.

N'hésitez pas à faire venir un fournisseur (Millipore , Sartorius ou autre)